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1、怎樣提高點(diǎn)樣效率? 點(diǎn)樣是造成TLC定量誤差的主要來(lái)源。 定量毛細(xì)管更適合較小體積的點(diǎn)樣;微量
注射器更適合較大體積的點(diǎn)樣。這主要是因?yàn)槲⒘孔⑸淦魇苄馀?、溶液回爬現(xiàn)象的影響較大。為避免不同定量毛細(xì)管理體制的
占樣誤差,建議一塊薄層板上用同一只定量毛細(xì)管。但應(yīng)注意更換樣品時(shí),應(yīng)將毛細(xì)管用超聲波或不同性溶課劑清洗干凈
。在制備樣品時(shí),溶樣溶劑黏度不能過(guò)高,以便于點(diǎn)樣;溶劑沸點(diǎn)過(guò)低則進(jìn)樣體積易變,過(guò)高則會(huì)改變展開(kāi)劑組成;對(duì)樣品溶解
度過(guò)高會(huì)使樣點(diǎn)發(fā)生空心現(xiàn)象,常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經(jīng)典TLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑3mm點(diǎn)間距離1-2cm底邊距離
1.5cm;HPLC樣點(diǎn)原點(diǎn)一般為直徑1mm點(diǎn)間距5mm底邊距1cm. 2、展開(kāi)劑的選擇 TLC與HPLC相比,一個(gè)突出的優(yōu)點(diǎn)就是流動(dòng)相的選
擇具有更大的靈活性,流動(dòng)相的選擇的目的是使絕大部分樣品的Rf值位于0.1-0.7之間并達(dá)到較好的分離,與此對(duì)應(yīng)的是流動(dòng)相
要有適當(dāng)?shù)膹?qiáng)度和組成。流動(dòng)相強(qiáng)度越大,溶質(zhì)Rf值越大,但很可能降低分離能力;另外單一溶劑很難分離較復(fù)雜的混合物、根
據(jù)相似相溶原理,要使用多元溶劑體系。一般展開(kāi)劑體系選擇如下:根據(jù)分離樣品性質(zhì)、薄層色譜板性質(zhì)選擇一個(gè)二元溶劑體系
,通過(guò)調(diào)節(jié)溶劑比例以尋求適合Rf值,適合的Rf值找到后,再尋求性參數(shù)相同的二元溶劑體系兩個(gè),以這三個(gè)組成為三點(diǎn)組成
一個(gè)三角形,則可看到:三角形頂點(diǎn)是二元體系,邊是三元體系,三角形內(nèi)是四元體系,并且性一致,可根據(jù)幾何原理得出任
一點(diǎn)組成,這種方法較為直觀,也較簡(jiǎn)單。 理想的顯色希望靈敏度高,斑點(diǎn)顏色穩(wěn)定、斑點(diǎn)與背景間的對(duì)比度好,斑點(diǎn)的
大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比,在樣品組成并不已知的情況下,通用顯色方法顯得尤為重要. 通用顯色方法主要有:
1、紫外照射法:方便、不破壞樣品; 2、碘蒸氣法:通用性強(qiáng),與紫外法結(jié)合靈敏度高于該兩法單獨(dú)使用; 3、熒光試劑:制
造熒光背景,使原來(lái)紫外下無(wú)熒光物質(zhì)被鑒別,有熒光物質(zhì)更明顯; 展開(kāi)劑選擇的大概原則 選擇展開(kāi)劑一般要用混合溶劑
:一般要有一種對(duì)所要展開(kāi)樣品溶解度較大的溶劑,視樣品的性,再選用相應(yīng)的體系
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